技術(shù)原理簡(jiǎn)介

基因敲入(Knockin)鼠是指通過(guò)TALEN/CRISPR技術(shù)在目的序列位置引進(jìn)特定的突變或外源基因的小鼠。通過(guò)針對(duì)基因靶序列設(shè)計(jì)相應(yīng)的打靶質(zhì)粒，然后根據(jù)需要插入的位置構(gòu)建含Knockin片段或點(diǎn)突變的Donor質(zhì)粒，將Donor質(zhì)粒與打靶質(zhì)粒共同顯微注射進(jìn)小鼠的受精卵中，TALEN/CRISPR定位到基因組上的靶序列并切割雙鏈DNA，在隨后的修復(fù)過(guò)程中，細(xì)胞以含同源序列的Donor質(zhì)粒為模版修復(fù)基因組DNA，最終獲得在目的DNA序列插入Knockin片段的Knockin小鼠。比如將報(bào)告基因(如EGFP，mRFP，mCherry，mYFP，或LacZ等)通過(guò)同源重組的方式引入目的基因的特定位點(diǎn)，從而跟蹤目標(biāo)基因的表達(dá)；也可以用報(bào)告基因取代大小鼠本身的基因，即：KO/KI同時(shí)發(fā)生。

TALEN/CRISPR構(gòu)建定點(diǎn)敲入小(大)鼠技術(shù)流程圖

服務(wù)流程及周期

服務(wù)流程及周期圖